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小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2ELISA試劑盒

  • 更新時間:  2020-06-09
  • 產(chǎn)品型號:  48T/96T
  • 簡單描述
  • 小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2ELISA試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量問題可包換包退,免除您的后顧之憂,所有的elisa試劑盒——免費(fèi)代測,全程Elisa實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo),免費(fèi)代做實(shí)驗(yàn)。
詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱:小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2ELISA試劑盒
英文名稱: Lp-PLA2 ELISA Kit

規(guī)格 :48T/96T
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..


?ELISA 試驗(yàn)時,注意事項(xiàng)如下: 
     1. 正式試驗(yàn)時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。 
     2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括: 
     (1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 
     (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值i大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。 
     (3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。 
     (4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
標(biāo)本的采集與保存:
1、血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時或4oC 過夜,然后1000×g 離心20 分鐘,取上清即
可,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿:用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘,
取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、組織勻漿:
1) 取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2) 可同時選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨,該過程需在冰上進(jìn)行(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2 次)。
3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,留取上清即可檢測。
4、其它生物標(biāo)本:請1000×g 離心20 分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國家承認(rèn)的“三證”,每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的生產(chǎn)批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時,可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;
補(bǔ)體的控制方法:
①用EDTA稀釋標(biāo)本;
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;
2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時間過長或凝固不全等;
控制方法:采血時規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時采用無菌試管,經(jīng)檢測后再低溫凍存;保存時間不宜過久,檢測時盡量采用新鮮標(biāo)本;對于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。
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